荧光摄影基础知识

很多做研究的老师和同学，在使用路阳的荧光蛋白激发光源时候遇到拍照问题，明明用荧光蛋白观察眼镜能够清晰看到荧光蛋白的表达，但很的单反相机拍不出来的荧光照片。总觉得荧光蛋白的拍照滤镜有问题，今天，我们工程师将单反相机拍荧光照片的基础知识给大家普及一下。

因单反相机是非常智能的相机，大家使用时候基本都是调整到auto档位，相机能够感知环境光线的明暗，自动调整曝光参数。拍出来的照片非常nice。但荧光图像拍照环境和常规照片不一样，荧光拍照时候，有强烈的激发光，需要用荧光拍照滤镜将激发光过滤掉，让荧光蛋白的荧光成像，有时候荧光表达的不是很亮，我们需要调整单反相机的ISO、快门速度和光圈大小。下面将这几个参数给大家做一个简单介绍：

1. 荧光拍照需要的设备：

   激发光源、拍照滤镜、单反相机、三脚架。

2. 
   

3. 安装转接环

   如果您的单反相机镜头不是67mm，需要一个转接环才能安装到相机镜头上。镜头尺寸一般标注在镜头的最前面一般标注为Φxx mm，如右图为直径77mm的镜头。先把转接环旋到镜头上，再把滤镜旋到转接环上即可。

   

4. 单反相机的拨轮：

4. 荧光摄影主拨轮选择M档

模式转盘的档位介绍：

全自动拍摄模式：此模式也叫傻瓜模式，不用设置任何参数直接可以拍摄照片。

P档程度模式：也叫自动可调模式，自动档，快门、光圈由相机来设定，也可以自己调节。

TV快门优先：快门优先多用于拍摄运动的物体上，特别是在体育运动拍摄中最常用。

AV光圈优先：光圈优先是一种曝光控制模式，适合拍摄人像 微距。

M档手动曝光：手动曝光模式，通过前拨轮设置快门速度，背面的快速转盘设置光圈大小。

B档快门：就是B门，长时间曝光或拍夜景用。即不松手快门不关闭。（须用三角架和快门线，否则影像发虚）同时通过前拨轮或背面的快速转盘还可调整光圈参数。

C档：用户自定义模式。

SCN全自动场景模式（人像风景夜景等多种拍摄模式）

CA创意自动：在此模式下用户可以通过菜单调整图像亮度、景深、照片风格等功能设置。

5.光圈：

光圈是一个用来控制光线透过镜头，进入机身内感光面的光量的装置，通常在镜头内。通俗讲就是光圈像一个门一样，门大进光多，照片越亮；门小进光少，照片越暗。

表达光圈大小用F值:

完整的光圈值系列如下： F1， F1.4， F2， F2.8， F4， F5.6， F8， F11， F16， F22， F32， F44， F64

数值越小，进光量越大（光圈越大），数值越大，进光量越小（光圈约小）

光圈两大作用：控制进光量，控制景深

如何调整光圈：

佳能单反相机在M档的时候拨动付拨盘可调整快门速度，按住AV按钮并转动付拨轮调整光圈大小。

佳能60D是先按住Q键，再转动付拨轮

6. ISO调整：荧光拍摄建议选择ISO200

 ISO：（International Organization for Standardization的缩写）

在胶片时代，胶片的感光度就是指底片对于光线的敏感程度，也可以理解为底片对于光线的反应速度。如今的ISO也是指相机中CMOS图像感应器对光线的敏感度。ISO对于成片最终的清晰度起到至关重要的作用。在M（Manual Exposure）档下，能够控制照片曝光量的就只有光圈、快门速度与ISO三项数值。

1. 光圈越大，进入相机的光就越多。光圈越小，进入相机的光就越少。

2. 快门速度越慢，进入相机的光就越多。快门速度越快，进入相机的光就越少。

3. ISO越低照片越暗，ISO越高照片越亮。ISO越低噪点越少，ISO越高噪点越多。

在保证照片正常曝光的情况下，ISO越低越好。

ISO怎么设置：

按下ISO档位，并旋转手柄轮盘，调到相应ISO

7. 荧光摄影建议设置的参数：

选择M档：关闭闪光灯，ISO200,光圈F5.6,快门1/60

因单反相机的镜头尺寸不一样，按键设置不同，参数设置会有差异。

建议大家ISO200下，分别调整光圈和快门速度，找到一个理想设置参数。

拍GFP荧光照片时候，有LUV-495A和LUV-520A两种拍照滤镜可选，LUV-495A不能隔离叶绿素的荧光。LUV-520A是窄带滤色片，拍出来是纯绿的图片，效果对比如下:大家也可参考《荧光蛋白拍照滤镜LUV-495A和LUV-520A的区别》

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