植物学硕士与GFP的爱恨情仇

依稀记得那是一个阳光明媚的午后，导师把我叫到幽暗的办公室，脸上带着谜一般的微笑看着我。那一瞬间我的瞳孔放大，内心忐忑，当下只想导师看不见我，然后以光速转身离开至导师的视线范围外。可现实是真的残酷啊！常话说得好，事出反常必有妖（苦笑ing）。“最近实验做的怎么样呀？基本实验技能都掌握的不差了吧！”“挺……挺好的，该学的都学了……”“我有一个想法，你看我们给xx蛋白融合GFP后是不是就可以追踪它在植物活体内的转移情况了？”从此，我与GFP演绎了一场的爱恨情仇狗血剧。
“师兄，你有没有构建过带GFP标签的基因表达载体啊？”“Of course!GFP这么小，很容易装进去的，你只需要如此……再这样……” “但我的目的基因有9k。”“打扰了，告辞。”嘴上说着不要，身体却很诚实。最终，尝尽各种方法，历时整整半年，我成功将融合GFP的目的基因通过多片段重组装入表达载体。我本属于这个世界，在那一刻，我觉得全世界都属于我（哈哈哈~哈哈~哈~~~）。
可好景不长，我的宇宙神话泡泡仅坚持了100h就被无情戳破了。我发现叶片上注射农杆菌的部位确实能观测到GFP荧光，但无法成功实现对蛋白的转移追踪，植株非注射叶片中呈现给我的只有一片黑暗，正如我的心情一样（送上一首凉凉给自己），当场自闭。随后，导师在听完我汇报后意味深长地说：“你有没有看过文献，别人将GFP融合在xx同源蛋白的N端还是C端，或者其他位置呢？GFP的融合位置对蛋白的表达和转移可能有影响。”从此以后，我明白了实验前大量阅读相关文献以及与导师沟通的必要性（一脸认真）。
历史性的一刻终于到来啦！我在植株非注射叶片上观测到蛋白转移后的GFP荧光了。

 
“你以为这样就结束了吗？”导师再次意味深长地的看着我。“你要拍怎样的照片去证明你蛋白的转移呢？”说完给了我一个高深莫测的背影缓缓离去。留下一头雾水的我，我当下拍上了日渐掉发的脑门儿，意识到荧光显微镜的图像无法直观体现出对GFP标签蛋白转移的追踪。我又默默地转过头看着取样后破破烂烂的植株，泪，再次流了下来（em……是咸的）……
事后我又从文献中了解到利用高强度紫外光源照射植株体即可激发GFP荧光，且可以在对样本零破坏的情况下实现对植株活体全局的荧光观测，直观追踪荧光蛋白表达。而正巧本实验室就有这么一台高强度紫外光源。“当上帝关了这扇门,一定会为你打开另一扇门”《圣经》诚不欺我。然而，上帝可能因为网络延迟问题没能及时收到我的求助，紫外灯下我的植株只能看到叶片上的点点繁星（其实是灰尘），我的绿色荧光呐！

 
百般无奈之下，只好拿出我玩英雄联盟的专注度，历经一整夜在x度，xx通，xx虫上的奋战后，感谢上帝给我安排的天使终于到来啦！她耐心的为我解答了我的所有疑惑。知悉天然GFP有多个吸收峰，更大和次大的激发波长分别是395nm和475nm，紫外光和蓝光均可激发荧光。而我构建载体所用为增强型绿色荧光蛋白(eGFP)，即GFP的第64位的苯丙氨酸置换成亮氨酸，第65位的丝氨酸置换成苏氨酸。EGFP在488nm的蓝光激发下产生波长为517nm的绿色发射光，其荧光强度是同条件下GFP的35倍多，但紫外光源无法激发荧光。恍然大悟的我啪的一下，历尽千辛万苦终于向上帝要来了天使小姐姐微信二维码，为荧光蛋白发愁的小伙伴们我只能帮你们到这里咯！

紧接着为期不到两日时间，就收到了天使小姐姐为我寄来可以免费试用的荧光蛋白激发光源 LUYOR-3415RG ！现在的人们都说生活需要仪式感，我也试试，洗完澡，吹干头发，戴上橡胶手套，我缓缓打开银色的手提箱，开启了新世界的大门。箱中静静躺着一把质地厚重的光源枪，蓝色的枪身，纯黑的握把，简约而不失高贵的安全锁扣，让我迫不及待的拿起它仔细端详（两眼放光）。只见在灯头上下各排列着一种波段的LED光源，我突然情不知所起而一往情深地按下灯的开关按钮，随即仿佛开启了新世界的大门，迫不及待地佩戴上帅气的观察眼镜，那一刹，我仿佛看到了世界上最美丽的光源。GFP，找到你了！