dio染料激发波长是多少？

dio染料激发波长是480nm，发射波长是510nm

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱)结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其更佳浓度条件下，将整个细胞染色。

dio染料的激发波长和发射波长

DiO即DiOC18(3)，全称为3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中，更大激发波长为484nm，更大发射波长为501nm。DiO的分子式为C53H85ClN2O6，分子量为881.72，CAS number为34215-57-1。DiO可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF，溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

DiO被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI，有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。DiO除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
    用于细胞膜荧光标记时，DiO的常用浓度为1-30μM，最常用的浓度为5-10μM。DiO可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

dio染料保存条件dio染料使用注意事项：：

4℃避光保存，一年有效。配制的储存液-20℃避光保存，半年有效。荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，zui佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR（深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。

dio染料的使用方法

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。注意：未使用的储存液保存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制，可以从推荐浓度的十倍以上寻找zui佳条件。

2. 悬浮细胞染色
（1）悬浮细胞密度为 1 × 10^6/mL加入到工作液中。
（2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞zui佳培养时间不同。
（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色
（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞zui佳培养时间不同。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

dio dye emission wavelength